1 概述

临床基因扩增实验，又称聚合酶链反应实验，是一种专门用于检测艾滋病、乙肝、禽流感等艾滋病毒感染性疾病的检测方法。它可以通过扩增病毒中包含的基因来检测某些病毒是否包含在一些病毒含量低的感染者中。由于检测方法能够检测普通检测难以检测的病毒，具有灵敏度高、特异性强、快速、样品要求低等优点，因此得到临床医生的广泛认可，并已广泛应用于医院的临床诊断和各防疫部门的家禽疾病诊断。然而，这种实验需要以确保绝对安全、合理配置和非常规范的操作为前提的棉花糖直播在线观看:实验室。近年来(lai)，临床基因扩增(zeng)试验实(shi)验室(shi)的构建越来(lai)越受到(dao)重视，因为它对(dui)检测结果的可(ke)靠性、准确性和安全性起着至关重要(yao)的作用(yong)。本文主要(yao)从临床基因扩增(zeng)试验实(shi)验室(shi)平面(mian)布局(ju)、空调通风(feng)系统设计、气流控制和污染防治等方(fang)面(mian)阐述实(shi)验室(shi)设计的主要(yao)特点。

临床基因扩(kuo)增试验(yan)实验(yan)室设(she)计(ji)的核心(xin)问题是如何避免污染。因此，实验(yan)室的平面(mian)布局、空调通风的系统设(she)计(ji)和气流控制都围绕着这个核心(xin)问题进行(xing)。下(xia)面(mian)将(jiang)分别解释这些方(fang)面(mian)。

2 PCR实验室平面布局

临(lin)床基因(yin)扩(kuo)(kuo)(kuo)增试(shi)验实验室原则上分(fen)(fen)为四个独立的工(gong)作(zuo)区(qu)(qu):试(shi)剂(ji)储存和(he)(he)制备(bei)区(qu)(qu)、样品(pin)(pin)制备(bei)区(qu)(qu)、扩(kuo)(kuo)(kuo)增反应混合物制备(bei)和(he)(he)扩(kuo)(kuo)(kuo)增区(qu)(qu)、扩(kuo)(kuo)(kuo)增产物分(fen)(fen)析区(qu)(qu)。为避免交(jiao)叉(cha)污染，进入每个工(gong)作(zuo)区(qu)(qu)必须严格遵循单一方向，即(ji)仅从试(shi)剂(ji)储存和(he)(he)制备(bei)区(qu)(qu)→样品(pin)(pin)制备(bei)区(qu)(qu)→扩(kuo)(kuo)(kuo)增反应混合物制备(bei)和(he)(he)扩(kuo)(kuo)(kuo)增区(qu)(qu)→扩(kuo)(kuo)(kuo)增产物分(fen)(fen)析区(qu)(qu)。

试剂和每个实验区域之间(jian)的样品(pin)转移应通过转移窗口进(jin)行。

聚(ju)合酶链反应(ying)实验(yan)室平(ping)面布置(zhi)示意图如图1所示。

图1 Pc实(shi)验室平面示意图布置(zhi)

3 实验室空调通风系统设计及压力控制

Pc实验室(shi)没有严(yan)格(ge)的(de)净化要求，但为(wei)了(le)避免各实验区(qu)之间交叉(cha)污(wu)染的(de)可(ke)能性，建议采用全输送、全排气的(de)气流组织(zhi)形式。同(tong)时，应严(yan)格(ge)控制(zhi)供气和排气的(de)比例，以保证(zheng)每个(ge)实验区(qu)的(de)压力(li)要求。

3.1试剂储存和制(zhi)备区

该(gai)(gai)(gai)实验(yan)区(qu)的主要操(cao)作是试(shi)剂(ji)储存的制(zhi)(zhi)备、试(shi)剂(ji)的分装和主要反应(ying)混合物的制(zhi)(zhi)备。试(shi)剂(ji)和用于样品(pin)制(zhi)(zhi)备的材料应(ying)直接运输到(dao)该(gai)(gai)(gai)区(qu)域，不得通过其他区(qu)域。试(shi)剂(ji)原(yuan)材料必须储存在该(gai)(gai)(gai)区(qu)域，并(bing)且必须在该(gai)(gai)(gai)区(qu)域准(zhun)备所需的储存库试(shi)剂(ji)。在这个地区(qu)，对气流压力的控(kong)制(zhi)(zhi)没(mei)有严格的要求(qiu)。

3.2样品制备区

该区的主要操(cao)作是保存(cun)临(lin)床样品、提取和(he)储存(cun)核(he)(he)酸(suan)(suan)(核(he)(he)糖核(he)(he)酸(suan)(suan)、脱氧核(he)(he)糖核(he)(he)酸(suan)(suan))以(yi)及当加入扩增反应管(guan)和(he)测定核(he)(he)糖核(he)(he)酸(suan)(suan)时合成核(he)(he)糖核(he)(he)酸(suan)(suan)。

该(gai)区(qu)域(yu)的压力梯度要求相对于邻近区(qu)域(yu)为(wei)正压，以避免(mian)气溶胶污(wu)染从邻近区(qu)域(yu)进(jin)入该(gai)区(qu)域(yu)。此外，由于样品添加(jia)操作过程(cheng)中可能会出现气溶胶污(wu)染，应避免(mian)在该(gai)区(qu)域(yu)不必要的行走。

3.3扩增反应混合(he)物(wu)和(he)扩增区的制(zhi)备

该(gai)区(qu)(qu)的主要操作是脱(tuo)氧核(he)(he)糖(tang)核(he)(he)酸(suan)或脱(tuo)氧核(he)(he)糖(tang)核(he)(he)酸(suan)扩增。此外(wai)，还(hai)可(ke)以在该(gai)区(qu)(qu)域将(jiang)制备的脱(tuo)氧核(he)(he)糖(tang)核(he)(he)酸(suan)模板(ban)和合(he)(he)成的脱(tuo)氧核(he)(he)糖(tang)核(he)(he)酸(suan)(来(lai)自样品制备区(qu)(qu))添加到反(fan)应混合(he)(he)物(wu)中，并将(jiang)主反(fan)应混合(he)(he)物(wu)(来(lai)自试剂储存和制备区(qu)(qu))制备到反(fan)应混合(he)(he)物(wu)中。在嵌(qian)(qian)套式(shi)聚合(he)(he)酶链反(fan)应测定(ding)中，反(fan)应管通常必(bi)须在第一轮(lun)扩增后打开(kai)，因此嵌(qian)(qian)套式(shi)扩增具有高污(wu)染风险(xian)，并且必(bi)须在该(gai)区(qu)(qu)域进行第二次样品添加。

该区域的压力梯度要(yao)求相对于邻近区域为负压，以(yi)避(bi)免气(qi)溶胶从(cong)该区域泄漏。为了避(bi)免气(qi)溶胶造成的污染，在这一(yi)地区不必要(yao)的步行应(ying)该减(jian)少到最低限(xian)度。个别操(cao)作，例(li)如

4 污染的预防与控制

聚合酶链(lian)反(fan)应实(shi)验(yan)室(shi)设计的(de)核心问(wen)题是(shi)如何避(bi)免污(wu)(wu)(wu)(wu)染(ran)。在实(shi)际(ji)工作(zuo)中(zhong)，常见有以下几种污(wu)(wu)(wu)(wu)染(ran)类型(xing):扩增产物(wu)污(wu)(wu)(wu)(wu)染(ran)；天(tian)然基因(yin)组DNA的(de)污(wu)(wu)(wu)(wu)染(ran)；试剂和(he)样品(pin)之间的(de)污(wu)(wu)(wu)(wu)染(ran)。一旦污(wu)(wu)(wu)(wu)染(ran)发(fa)生，必须停止实(shi)验(yan)，直(zhi)到找到污(wu)(wu)(wu)(wu)染(ran)源，实(shi)验(yan)结果(guo)必须无效，实(shi)验(yan)需要重新进行(xing)。因(yin)此(ci)，污(wu)(wu)(wu)(wu)染(ran)发(fa)生后在实(shi)验(yan)室(shi)左右寻找污(wu)(wu)(wu)(wu)染(ran)源不仅费时费力，而(er)且(qie)浪费人力物(wu)力。因(yin)此(ci)，避(bi)免污(wu)(wu)(wu)(wu)染(ran)，预防(fang)，而(er)不是(shi)消除，应该是(shi)第一步。

4.1严格划分工(gong)作区域

(1)合理(li)设置各实验区(qu)域；

(2)每(mei)个实(shi)验区应有明(ming)显的标志(如醒目的门牌或(huo)不(bu)同的底色等)。)以(yi)避免混淆设备和物品，试剂(ji)等。在每(mei)个不(bu)同的实(shi)验区域。

4.2合理的系统设置

(1)合理(li)的空(kong)调通风系统设置，尽量使用全(quan)送全(quan)排空(kong)调系统；

(2)严格(ge)的气流压(ya)力(li)(li)控(kong)制确保(bao)不同实验(yan)区域的不同压(ya)力(li)(li)要(yao)求。

4.3标准化操作

(1)临(lin)床(chuang)基(ji)因扩(kuo)增试验实验室技术(shu)人(ren)员必须经(jing)过在职培训，培训合格后方可(ke)从事临(lin)床(chuang)基(ji)因扩(kuo)增试验；

(2)在(zai)实(shi)验操(cao)作过程(cheng)中(zhong)，操(cao)作者必须戴手套并(bing)经常更换。此外，在(zai)操(cao)作中(zhong)使(shi)用(yong)一次性盖子也(ye)是防(fang)止污(wu)染(ran)的有效措施。

(3)清洁及时(shi)正确。实验结束后，必须立即清理(li)该区域。除(chu)了(le)用常(chang)规消毒(du)液擦拭消毒(du)表面或用紫外(wai)线灯(deng)照射消毒(du)外(wai)，一些实验设(she)备还应进行高压消毒(du)。

4.4严格管理

(1)严格(ge)控制(zhi)人员进(jin)出实验(yan)(yan)室。与(yu)实验(yan)(yan)无关的人员不得随意进(jin)出实验(yan)(yan)室，并在(zai)一定(ding)条(tiao)件下(xia)设(she)置独立的进(jin)出整个(ge)实验(yan)(yan)区的通道(dao)和(he)门。

(2)每个实验区(qu)应使用带有明显区(qu)分标(biao)志(如(ru)不(bu)同颜色(se))的(de)工作(zuo)服(fu)，工作(zuo)人员离开时，不(bu)得(de)将该区(qu)域(yu)的(de)工作(zuo)服(fu)带到其他区(qu)域(yu)。

(3)尽量(liang)减少(shao)实验区不必(bi)要的行(xing)走，以减少(shao)交(jiao)叉污染的可能性。

(4)扩增(zeng)产物分析(xi)区域是扩增(zeng)产物污染的最(zui)重要来源。废液不能倾(qing)倒(dao)在(zai)(zai)实(shi)验室内，必须用(yong)(yong)消毒剂(ji)浸泡(pao)消毒后丢弃在(zai)(zai)实(shi)验室外。用(yong)(yong)过的吸头等一次性材料也应在(zai)(zai)用(yong)(yong)消毒剂(ji)浸泡(pao)消毒后，如焚烧(shao)等进(jin)行均匀处理(li)。

(5)扩增产物分析区域可能会使(shi)用(yong)一些(xie)诱变和有(you)毒物质(zhi)。应特(te)别注(zhu)意实(shi)验室人员的(de)安全保护。

4.5完成实验(yan)室(shi)配套设施